那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下淺談層析實驗中的氣泡問題（三）：

       說到氣泡，你可能會聯(lián)想到酣暢淋漓的可樂，通透上頭的啤酒，亦或是流光飛舞的浪漫，生活中的氣泡，似乎還帶有那么一絲美好，然而對于實驗來說，尤其是在大多不會配置在線脫氣單元的FPLC系統(tǒng)上做的層析實驗，氣泡就如煩人的蒼蠅，鞋里的石子，令人如鯁在喉不吐不快，如若是重要樣品、昂貴填料，氣泡帶來的實驗失敗那簡直是小型災(zāi)難現(xiàn)場。那么氣泡是源自何來，而又去之何處，怎么能讓它們從我們的系統(tǒng)里消失，以下此篇，做一個小小探討，拋磚引玉，共謀對策而滅之。

實際案例

Fig.1 氣泡造成的UV雜峰

Fig.2 氣泡造成的系統(tǒng)壓力波動

這些癥狀基本能覆蓋大部分的層析實驗問題，可見氣泡的破壞力和惱人程度，知己知彼方才能有的放矢，那么氣泡是如何形成的呢？流動相中氣體形成的原因有多種，*根本的還是由于氣體在液體中達(dá)到過飽和狀態(tài)；平衡狀態(tài)時溶解空氣的量與溶液的性質(zhì)、氣體的種類有關(guān)，也與外界條件有關(guān), 主要的外界條件有以下 3 種。

● 在層析實驗中，有很多溶液混合的操作，如置換緩沖，洗脫等等，所以一些溶液的混合需要盡量避免，比如乙醇溶液和鹽溶液，需要用純水隔開，否則易造成氣泡析出，所以當(dāng)乙醇溶液保存的系統(tǒng)需要進(jìn)行實驗時，緩沖液是鹽溶液如PBS，我們就需要用純水先做系統(tǒng)沖洗，再做PBS的填充。

Fig.4 緩沖液中析出的氣泡

●如果實驗設(shè)計中，不可避免的需要兩種不同極性溶劑的混合，還要避免氣泡，則需要 從混合處想辦法，一般的層析系統(tǒng)兩相溶劑的混合是在有攪拌裝置的動態(tài)混合池中進(jìn)行，混合劇烈，容易析出氣泡，此時可以考慮將動態(tài)混合器改為靜態(tài)混合器，讓溶劑的混合方式由劇烈變?yōu)闇睾?，會有較好的避免氣泡的效果。

 Fig.5 動態(tài)混合器和靜態(tài)混合器

另外，除了溶液帶入，系統(tǒng)中的漏點也會引入氣泡，尤其是未加壓的低壓流路，在管路接頭、閥和轉(zhuǎn)子等分離結(jié)構(gòu)位置，容易產(chǎn)生漏點，系統(tǒng)中如果發(fā)現(xiàn)有氣泡造成基線波動，而在溶液進(jìn)口又沒發(fā)現(xiàn)可見的氣泡，則需要在系統(tǒng)內(nèi)查找漏點，有效的辦法是用透明的ETFE管代替不透明的Peek管，觀察是哪一段出現(xiàn)的氣泡，以便判斷漏點，及時處理。

Fig.6 管路中漏入的氣泡

關(guān)于溶劑的脫氣方法，目前常用的有兩種：超聲脫氣和負(fù)壓脫氣；超聲脫氣就是利用超聲鍋或者超聲探頭，當(dāng)高功率超聲波耦合到液體中時，液體分別在高壓和低壓循環(huán)中被壓縮和膨脹，在低壓循環(huán)中，會產(chǎn)生微小的真空氣泡（所謂的空化氣泡），這些氣泡會在多個壓力循環(huán)中增長。在氣泡生長的那些周期中，液體中的溶解氣體進(jìn)入真空氣泡，這樣真空氣泡就變成了不斷增長的氣泡。超聲脫氣特點是操作便捷，效率高，脫氣快，一般10-15分鐘的超聲可以去除溶液中大部分氣泡，缺點是容易發(fā)熱，需要降溫，注意在用超聲鍋脫氣時，溶劑瓶蓋要擰松或者拿掉；負(fù)壓脫氣是利用機(jī)械產(chǎn)生負(fù)壓的方式使溶液中的氣泡析出，一般分析型色譜儀或者需要高精度檢測的儀器，在流路中配置在線脫氣單元，都是利用負(fù)壓的原理進(jìn)行脫氣，實驗室常用的是真空抽濾裝置，既能過濾溶液，又能脫氣，實用性高。

Fig.7 超聲脫氣

Fig.8 真空抽濾裝置

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于淺談層析實驗中的氣泡問題（三）。
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